螺旋接种原理

螺旋接种法是一种标准化的接种计数法,它将巴斯德计数法标准化。

用高精度注射器将样本以阿基米德螺旋对数递减的方式从培养皿中心向外围接种在旋转的培养皿表面。
它允许在同一个培养皿上接种4个稀释对数,通过递减提供分散的菌落。在培养皿的所有点上,体积是校准的并已知。

在传统方法中,要连续进行四次稀释,并在第 4 次稀释时接种,以获得有用的培养皿。
这里的螺旋接种法允许我们直接接种原液样品。

マニュアル式塗抹メソッド

手工接种是一种需要重复操作的方法:至少需要 4 次稀释和 4 次连续接种,才能获得 1 个有用的培养皿。

自動スパイラルメソッド

使用这种方法,只需使用一个培养皿即可进行分析!

传统方法与螺旋接种法的比较

螺旋接种法是一种在培养皿表面进行接种的方法。它与实验室常用的接种方法相似。
与参照方法相比,RAEMA 等实验室间测试表明,这两种方法在统计学上没有显著差异。

以下是参照方法与螺旋接种法之间的比较研究:

目的: 通过与参照方法 "手工接种"(传统方法)进行比较研究,研究在指数递减模式下使用 easySpiral / easySpiral Pro 接种(称为螺旋接种法)的可靠性。

得出结论: 我们的研究结果表明,easySpiral 所采用的螺旋接种法与传统方法之间存在很强的相关性 (R2 = 0.989)。此外,两种方法之间的对数 CFU/mL 平均差异比最大差异低 12 倍,因此并不显著。

传统方法与螺旋接种法的比较

螺旋接种法和传统方法得出的大肠埃希氏菌计数(单位:Log CFU/mL)之间的相关性

使用螺旋接种法将不同浓度的大肠杆菌接种到MacConkey培养基上的实例

螺旋接种法的不同浓度

2.6 x 103

螺旋接种法的不同浓度

1.3 x 104

螺旋接种法的不同浓度

2.6 x 104

螺旋接种法的不同浓度

1.3 x 105

螺旋接种法的不同浓度

2.6 x 105

螺旋接种法是否标准化?

是的,它是 ISO 7218ISO 4833-2 中提到的用于嗜中性菌群计数的标准技术。此外,美国市场上的 FDAAOAC 也采用了这种方法。

摘自 ISO 4833-2 "本附件规定了使用螺旋接种装置接种食品、饲料和环境样品中微生物的方法。"

来自 FDA - BAM: "牛奶、食品和化妆品中微生物的螺旋接种计数法(SPLC)是美国食品卫生协会(APHA)和美国食品添加剂和污染物分析委员会(AOAC)的官方方法。"

ISO 4833-2

ISO 7218

FDA BAM

如何计算?

细菌浓度的计算方法是将计数所得的菌落数除以每个扇形区的接种体积。菌落总数可以手动计数(使用计数网格或任何手动菌落计数器),也可以使用任何自动菌落计数器Scan进行自动计数。
手动计算方法

手动计算螺旋接种法接种的样品浓度需要使用随 easySpiral 自动接种仪提供的计数网格。

计数网格

这个计数网格分为 4 个象限 : A | A | B | B。每个象限又分 6 个扇形区域。

计数网格:第 1 步

从 1 区段(最稀疏的区段)开始从外向内数菌落,数到第 20 个菌落所在的区域为止,最后数完该区域的所有菌落。

计数网格:第二步

完成第 20 个菌落所在区域的计数。

计数网格:第 3 步

计算相对象限同一扇区的菌落数。

将这两个象限的菌落数相加: (n1 + n2) = N

用 N 除以完成计数的扇形区域接种体积:V(供应商提供的累计体积)。

必要时乘以稀释因子:D

乘以1000倍,将µL 转换为mL 。

细菌浓度: C(单位 CFU/mL)。

螺旋计数公式

替代计算方法

请参考用户手册的附录,不使用螺旋计数公式

螺旋计数结果表
结果表

自动计算方法

Interscience 提供了一系列菌落计数器,可对使用螺旋接种的样品进行自动计数。

使用螺旋方法的自动计数: Scan
自动菌落计数器
Scan 300 | Scan 500 | Scan 1200 | Scan 4000

使用螺旋方法的自动计数:ScanStation
菌落实时培养及计数工作站
ScanStation 100 | ScanStation 200 | ScanStation 300

螺旋接种法:45 年的经验积累

45 年来,Interscience 自动接种仪一直是全球食品、医疗、研究、化妆品、制药和益生菌实验室的热门产品。
1973

1973: 螺旋接种法

美国 Cincinnati 的 FDA(食品和药品管理局)研究员 Ed Campbell 博士发明了螺旋接种法。

1979

1979 : 推出自动接种仪Spiral DS

推出自动接种仪Spiral DS

1992

1992: 获得螺旋接种相关专利

Dr. Ed. Campbell 博士和 Interscience 创始人 François Jalenques 共同为螺旋接种法的升级版申请专利。

1996

1996 : 推出自动接种仪Spiral DS+

推出自动接种仪Spiral DS+

2010

2010 : 推出自动接种仪 easySpiral 和 easySpiral Pro

Interscience 推出全新架构的 easySpiraleasySpiral Pro:速度更快,使用更方便。

2012

2012: 推出自动稀释接种仪easySpiral Dilute

easySpiral Dilute 成为市场上第一款也是唯一一款带稀释功能的自动接种仪。

2020

2020 : 推出自动接种仪 easySpiral pro Milk

推出自动接种仪 easySpiral Pro Milk

常见问题

  • 我需要更换培养基/培养皿品牌吗?
    耗材不是固定的,因此不需要更换培养基/培养皿的品牌。不过,培养基每升应含有 12 至 15 克琼脂。 Interscience easySpiral 的转塔上有一个配重,可固定接种针,使其适用于所有培养皿,甚至是手工倒入的琼脂培养皿。
  • 我必须在无菌环境中工作吗?
    使用螺旋接种法时,建议在无菌环境、微生物安全柜 (BSC) 或层流保护罩中进行操作。对于无法在这些条件下工作的实验室,我们建议将自动接种仪放置在本生灯附近。Interscience 还提供一种外壳保护装置,可安装在 easySpiral 上,以防止工作平台暴露在空气中。
  • 哪些微生物可以使用螺旋接种法?
    经实验室验证后,所有通常在表面接种的微生物都可以用螺旋接种法进行接种。
  • 螺旋接种法可以完成多少个稀释梯度?
    螺旋接种技术可在同一培养皿中实现相当于 4 个稀释梯度:原液和该样品的 3 个连续稀释梯度。螺旋稀释是通过将线性递减的样品按阿基米德螺旋形铺展开来实现的,样品高度集中在中心,而边缘则少得多。
  • 螺旋接种法的应用领域有哪些?
    螺旋接种法可用于各种应用领域,如食品加工中所有基质(包括有色基质或作为原料的牛奶)质量标准的计数。它还可用于细菌动力学研究。螺旋接种法可用于药理学或美容学领域的挑战性测试、研发、质量控制和存活率/效价测试。
  • 螺旋接种法有哪些优点?

    螺旋接种法涉及多个方面:

    • 巴斯德方法的标准化
    • 控制购买非适应性培养基/耗材的成本
    • 减少固定培养基库存
    • 保持实验室的专业科学知识
    • 利用螺旋接种技术在实验室内可自由验证任何参数
    • 兼容任何类型的样品,甚至是有色样品
    • 在更短的时间内更快地处理样品
  • 螺旋接种法有哪些卫生标准?
    螺旋接种技术可接受的标准取决于检测阈值。除严格厌氧菌必须双层接种外,任何高于 100 CFU 的标准均可使用(须经实验室验证)。科学研究重视并认可实验室内的螺旋接种技术。